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叶绿体中色素的提取和分离知识

  一、 为什么要选新鲜绿色的幼嫩叶片?

  因为叶绿色含N﹑Mg,而老叶中这两种矿质元素很多已经分解转移,所以鲜绿色的幼叶中叶绿素的含量高,适合于实验。

  二、 制备滤纸条要剪去两角

  实验中需将滤纸条的一端剪去两角,为什么这样做,如果不会怎么样呢? 原来若不剪去滤纸条的两角,色素带的两边和中间不是在一条直线上。这是由于滤纸条两边水分子可以向三个方向散失,向上“跑”的速度快。而滤纸条中间的水分子只能向两个方向散失,分别是向内和向外,因而会“跑”得慢一些。而现在剪去滤纸条的两个角,可以在一定程度上加快中间色素的扩散速 度,减慢两边色素的扩散速度,从而真正意义上使这些色素从同一起点随层析液扩散。

  三、为什么研磨时加无水乙醇或丙酮?

  因为色素是有机物,根据相似相容性原理,无水乙醇或丙酮能溶解色素。

  四、为什么加入少许二氧化硅?

  在提取色素的过程中,要加人少许二氧化硅。原来是为了研磨得充分。二氧化硅就是石英沙子,研磨时可以增大强度,加快细胞和叶绿体的破裂,而使叶绿体中的色素释放出来。

  五、为什么加入少许碳酸钙?

  在提取色素的过程中,要加人少许碳酸钙。原来是为了防止在研磨时叶绿体中的色素受到破坏。叶绿体中的色素原本所处的环境具微碱性。在实验中,研磨会使细胞结构遭到破坏,细胞液中有机酸流出,酸性的细胞液就会接触到叶绿体中的色素,致使叶绿素的分子结构遭到破坏,使叶绿素失镁,呈黄褐色,如同我们看到到腌制的黄瓜会变色一样,而碳酸钙是强碱弱酸盐,碳酸钙在水中的溶解度很小,但还是有一部分得到溶解,中和细胞液的酸性,制造了一个弱碱环境,保护了色素。

  六、为什么用单层尼龙布过滤?

  在过滤时,漏斗基部放一块单层尼龙布,老教材中是用滤纸来过滤的。过滤的目的是去掉不需要的杂质如破碎的细胞、二氧化硅、碳酸钙等,相对而言,单层尼龙布可以让色素溶液更好地通过效果比滤纸要好。

  七、 为什么用棉塞塞紧试管?

  将色素收集在试管中后,要用棉塞塞紧。原因是色素很容易迅速地被空气中的氧气氧化分解乙醇酸和甘氨酸,从而使实验失败。

  八、 为什么滤纸预先干燥处理?

  这是因为干燥的滤纸,使层析液在滤纸上能快速扩散,所以预先干燥处理。

  九、为什么滤液细线要直、细、匀?

  因为滤液细线只有画得细而直,才能使色素随层析液扩散的起点一致,这样使分离出的色素带平整不发生重叠。

  十、为什么滤液细线干燥后再画一两次?

  这样可以分离到更多的色素,使分离出的色素带清晰分明。

  十一、为什么滤液细线不触及层析液?

  这直接关系到实验的成败如否,如果发生了这种情况,实验一定是失败的。为什么滤液细线不触及层析液是为了防止色素直接溶解到层析液中,这样就彻底得不到色素带了。

  十二、从色素带中我们能得到什么信息?

  最上端的橙黄色带为胡萝卜素,其次的黄色带为叶黄素,紧接其下的蓝绿色带为叶绿素a,最下方的黄绿色带是叶绿素b;最窄的色素带是胡萝卜素,最宽的色素带是叶绿素a;根据实际纸层析各色带的距离,叶绿素a和叶绿素b胡萝卜素的距离最小的,叶黄素两相邻色素带距离最大。

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